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第三节 革兰阳性杆菌(第2页)

2.呕吐型:由耐热的肠毒索引起,于进餐后1~6h发病,患者都有恶心和呕吐,仅部分有腹泻,病程平均不超过lOh。

1.标本采集:采取可疑食物或收集腹泻粪便和呕吐物进行检验。除作分离培养外,细菌计数对本菌所致食物中毒有诊断价值,因暴露于空气中的食品均在一定程度上受本菌污染。

2.检验方法:

(1)涂片镜检:将采集的标本用无菌生理盐水制成菌悬液,直接涂片,革兰染色镜检。

(2)活菌计数:将采集的标本用无菌生理盐水稀释成lO^-1~10^-3。1涂布法:取各稀释液O.lml分别接种于卵黄琼脂平板上,用L形玻棒涂布均匀,置35℃孵育12h,本菌在该平板上产生蜡样光泽,易于识别。2倾注平板法:取各稀释液O.lml注入空的无菌平皿,将融化冷至45℃~50℃的营养琼蜡适量倾入并立即混匀,冷凝后置35℃培养24~48h,每个稀释度平行作两个平皿。计数时选择菌落数在30~300个之间的平板计数。一般认为蜡样芽孢杆菌>10^5个/g或>10^5个/ml时,即有发生食物中毒的可能。

(3)分离培养:需氧或兼性厌氧,营养要求不高,普通营养琼脂平板上即可生长。血平板上形成明显的β溶血环,菌落似毛玻璃状。

(4)鉴定:根据形态、染色、生化反应等作出初步鉴定,之后可作血清学和噬菌体分型。

(5)药敏:本菌对氯霉索、红霉素和庆大霉素敏感,对青霉素、磺胺类和呋喃类耐药。

奴卡菌属(Nocardia)

本菌属有9个菌种,引发人类奴卡菌病的主要为星形奴卡菌(N.asteroides)、巴西奴卡菌(N.brasiliensis)和鼻疽奴卡菌(N.farcini-ca).我国以星形奴卡菌为主。它们是一类机会致病菌,其感染常发生于白血病、恶性淋巴瘤、哮喘、支气管扩张、结核病、慢性阻塞性肺部疾病、血色素沉着症、溃疡性结肠炎、酒精中毒、肝硬化、皮质类固醇治疗、接受肾和心脏移植的病人。本菌主要通过呼吸道引起原发性、化脓性肺部感染,可出现类似结核的症状,并可经血液播散,到达机体任何器官。奴卡氏菌病的病人大约有13患转移性脑脓肿,病人有头痛、癫痫发作、病灶神经缺陷或其他神经异常,但是血液和脑脊液培养总不能证实本菌的存在。有些患者痰培养奴卡菌阳性,但没有奴卡氏菌病的临床证据,星形奴卡菌可能是呼吸道的正常菌群,因此分离物存在的意义有赖于临床诊断。巴西奴卡菌常引起皮下感染,经常累及的部位是足部和腿部,故称足分枝菌病(a),本病常发生在南美洲、拉丁美洲,墨西哥也有发生。

1.压片检查:将组织或渗出液等标本置于玻片上革兰染色镜检,可发现菊花状物,但末端不膨大,革兰阳性,抗酸弱阳性。本菌在脑脊液、脓胸穿刺液及痰中不形成菊花状物。

2.培养:接种沙氏培养基、血平板均可生长,不同种类可产生不同的色素。

3.鉴定:培养24~48h出现小菌落,粗颗粒样,表面干燥,涂片染色为革兰阳性纤细分枝菌丝,具弱抗酸性,可初步确定。星形奴卡菌45C可生长,与其他奴卡菌可鉴别。

4.药敏:首选青霉素,然后为红霉素、四环素、林可霉素和磺胺。

分枝杆菌属(terium)

本菌属归属于放线菌科。已发现的分枝杆菌有100多种,广泛分布于土壤、水、人体和动物体内,主要引起肺部病变,尚可引起全身其他部位的病变,常见的有淋巴结炎、皮肤软组织和骨骼系统感染,对严重细胞免疫抑制者还可引起血源性播散。临床将分枝杆菌分为结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、麻风杆菌及腐物寄生性分枝杆菌(无致病性):

1.结核分枝杆菌:是人类分枝杆菌病最主要的病原体,因其胞壁含有大量脂质成分,抵抗力强、能耐低温、耐干燥,在干燥的痰中可存活6~8个月,含有结核分枝杆菌痰液的尘埃可保持8~lOd的传染性。该菌对湿热敏感,60℃半小时、80℃以上5min以内可死亡在煮沸条件下可完全杀菌,所以对于痰液污染物可通过焚烧灭菌。

另外,结核分枝杆菌对紫外线抵抗力差,日光直射4h即可死亡。虽然在70%~75%乙醇中数分钟即被杀死,但由于乙醇能使痰中的蛋白质凝固,因此不宜用于痰的消毒。

对人类致病的结核分枝杆菌包括人结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌,统称为“结核分枝杆菌复合群”。不同结核分枝杆菌复合群引起的临床症状相似,治疗也相同。我国以人型结核分枝杆菌感染的发病率最高,主要通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径感染机体,引起多种脏器组织的结核病。其中以肺结核最为多见,开放性肺结核患者咳嗽时排出颗粒形成气溶胶,当易感者吸入气道达肺中后,其中90℃的菌体可经粘膜纤毛运动而排除,只有一小部分进入肺泡,被肺泡中的巨噬细胞吞噬,因菌体的脂类等成分能抵抗溶酶体的作用,故细菌能够在巨噬细胞内繁殖,导致巨噬细胞裂解,释放出的结核杆菌可再度被巨噬细胞吞噬,通过巨噬细胞将细菌带至其他部位。这种渗出性炎症,即为原发性感染,原发病灶多见于肺尖、下叶的上部接近胸膜处,多能自愈,形成纤维化或钙化灶。机体内有潜在感染灶的人,一般来讲,有l0%可能复发,在感染的最初几年危险性最高。在AIDs病人中,肺结核多为原发性,进展迅速,经血流播散局部的纤维化和干酪样病变较少。93%的从未经治疗患者中分离到的结核分枝杆菌对抗结核药物敏感,对两药或三药治疗方案反应良好。但由于发生基因突变,目前23以上的临床分离株对多种抗结核药物产生耐药性。

2.麻风分枝杆菌:是麻风病的病原菌。麻风病是由于细胞免疫缺陷,使感染的麻风分枝杆菌大量繁殖形成局部肉芽肿所致,可影响皮肤、外周神经,表现为皮肤感觉缺失和周围神经增厚。从鼻肉芽肿上脱落的菌体是传播的主要原因,可因密切接触引起感染。麻风杆菌在体外不能培养。

3.非结核分枝杆菌(NTM):NTM属于环境分枝杆菌,主要来源于污水、土壤、气溶胶。流行病学显示NTM的感染率日趋上升。非结核分枝杆菌感染具有以下特点:

(1)多发生于机体免疫力低下时,为机会性感染,患者多为老年基础肺疾病者、使用激素、免疫抑制剂者、AIDS患者等。

(2)该菌的致病力较结核分枝杆菌低,它所导致的疾病往往进展缓慢、病程较长,且病灶范围小,症状轻。

(3)多合并有人类免疫缺陷病毒感染,NTM是AIDS的主要机会致病菌,最常见的感染是鸟一孢内分枝杆菌。

(4)可与结核分枝杆菌合并感染,多见于有空洞的结核患者身上。

(5)对抗结核药具天然的耐药性,临床疗效不佳。

(6)肺部症状与X线表现程度不符,非结核分枝杆菌引起的肺部感染症状较轻,但胸片可表现为广泛的病灶。

l,标本直接检查

(1)显微镜检查:1直接涂片检查:厚涂片,挑取痰或其他处理过的标本约O.lml,涂抹于载玻片上,经自然干燥和火焰固定后作抗酸染色,镜检。报告方法:(一):全视野(或100个视野)未找到抗酸菌;(+):全视野发现3~9个;(++):全视野发现10~99个;(+++):每视野发现l~9个;(++++):每视野发现10个以上(全视野发现1~2个报告抗酸菌的个数)。2浓缩集菌涂片检查:将采集标本离心,取沉淀涂片,或采用漂浮集茵法,集菌后标本经反复多次涂片使涂层加厚,一般取3~4接种环,涂片面积直径大约15mm,干燥固定后染色镜检。

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